菌体蛋白饲料中真蛋白的测定方法 （含有真菌）

测定菌体蛋白饲料中的真蛋白含量是为了确保饲料的营养价值和质量。含有真菌的菌体蛋白饲料中，真蛋白的测定常用的方法是基于凯氏定氮法（Kjeldahl method）。
1.样品制备:
取适量菌体蛋白饲料样品，粉碎至一定粒径。
2.蛋白质水解:
在酸性环境中高温加热样品，使其中的蛋白质水解为氨基酸。
3.氨的蒸馏:
通过蒸馏，将产生的氨从样品中蒸馏出来，并在酸性溶液中被捕获。
4.滴定测定:
使用标准的酸溶液滴定被捕获的氨，从而计算出蛋白质含量。
5.计算:
根据氨的量计算真蛋白的含量。通常，每16克氮代表100克蛋白质。
注意: 这种方法测定的是总氮含量，从中估算蛋白质含量。可能并不完全等于真蛋白的实际含量，因为饲料中可能还含有其他非蛋白质形式的氮。其在农业和饲料工业中得到了广泛的应用，因为它是测定蛋白质含量的标准方法，并且相对简单和准确。
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实验室常用考马斯亮蓝G-250法，不是以测定"氮"含量为基础。马斯亮蓝是一种甲基取代的三苯基甲烷，分子中磺酸基的蓝色染料，在465nm处有最大吸收值。考马斯亮蓝G-250能与蛋白质通过范得华相互作用形成蛋白质-考马斯亮蓝复合物蓝色溶液，引起该染料的最大吸收λmax的位置发生红移，在595nm处有最大吸收值。由于蛋白质-考马斯亮蓝复合物在595nm处的光吸收远高于考马斯亮蓝在465nm处的光吸收，因此，可大大地提高蛋白质的测定灵敏度。蛋白质-考马斯亮蓝复合物溶液颜色的深浅与蛋白质的浓度成正比。利用溶液颜色的差异进行比色测定，适合于蛋白质类的定量分析，呈色反应颜色稳定、灵敏度高，最低测试蛋白质量在1ug左右。但是考马斯亮蓝G250分子含苯环。

也可以用“紫外吸收法”，它也不是以测定“氮”含量为基础，其中以280nm处的吸光度值是最常用的紫外吸收法。其原理是蛋白质分子中酪氨酸、苯丙氨酸和色氨酸残基的苯环含有共轭双键，使蛋白质具有吸收紫外光的性质。吸收高峰在280nm处，其吸光度（即光密度值）与蛋白质含量成正比。此外，蛋白质溶液在238nm的光吸收值与肽键含量成正比，利用一定波长下，蛋白质溶液的光吸收值与蛋白质浓度的正比关系，可以进行蛋白质含量的测定，三聚氰胺等化合物含有共轭双键的苯环，但是没有肽键，所以238nm处的吸光度值可以排除其它苯环共轭双键的干扰。